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May 30, 2023

Evaluación antiplasmodial in vitro e in vivo del azúcar.

Scientific Reports volumen 13, Número de artículo: 12228 (2023) Cite este artículo 203 Accesos 1 Detalles de Altmetric Metrics Las infecciones por Plasmodium falciparum (Pf) resistentes a los medicamentos son una carga importante para el

Scientific Reports volumen 13, número de artículo: 12228 (2023) Citar este artículo

203 Accesos

1 altmétrica

Detalles de métricas

Las infecciones por Plasmodium falciparum (Pf) resistentes a los medicamentos son una carga importante para la población y el sistema sanitario. El establecimiento de resistencia del Pf a la mayoría de las terapias antipalúdicas existentes ha complicado el problema, y ​​la aparición de resistencia a los derivados de la artemisinina es aún más preocupante. Es cada vez más difícil curar a los pacientes con malaria debido a la disponibilidad limitada de medicamentos antipalúdicos eficaces, lo que genera una necesidad urgente de tratamientos más eficaces y asequibles para erradicar esta enfermedad. En este documento, se prepararon y evaluaron nuevos análogos de nucleósidos, incluidos híbridos de morfolino-nucleósido y derivados de nucleósido tiosustituidos, para determinar su actividad antiparasitaria in vitro e in vivo, lo que generó algunos resultados, especialmente los conjugados de nucleósido-tiopiranósido, que son altamente efectivos contra las cepas Pf3D7 y PfRKL-9. en concentración submicromolar. Un derivado de adenosina y cuatro análogos de nucleósidos de pirimidina redujeron significativamente la carga parasitaria en modelos de ratón infectados con Plasmodium berghei ANKA. Es importante destacar que no se observó hemólisis ni citotoxicidad significativas hacia la línea celular humana (RAW) para los impactos, lo que sugiere su perfil de seguridad. La investigación preliminar sugirió que estos conjugados de tioazúcar y nucleósido podrían usarse para acelerar el proceso de desarrollo de fármacos antipalúdicos y, por lo tanto, merecen una mayor investigación.

La malaria sigue siendo un problema de salud mundial, con 247 millones de infecciones y 625.000 muertes en todo el mundo en 2021, principalmente entre niños y mujeres embarazadas1. La Región de África de la OMS es responsable de una cantidad desproporcionadamente grande de la carga mundial de malaria. La malaria humana es causada por cinco especies de protozoos parásitos del género Plasmodium transmitidos por mosquitos, de los cuales el más prevalente y mortal es Plasmodium falciparum (Pf), responsable de alrededor del 90% de las muertes relacionadas con la malaria2. A pesar de varios intentos de control y erradicación de la malaria, la mayoría de los países no han podido erradicar la enfermedad3. La resistencia a los medicamentos, la toxicidad, la falta de una vacunación eficaz y la baja eficacia de los medicamentos son factores que contribuyen a esto4. La batalla en curso contra la resistencia a los medicamentos de Plasmodium implica la exploración y el desarrollo de una amplia gama de terapias5. La vacuna actual utilizada para la prevención de la malaria Pf, RTS, S/AS016, proporciona sólo una protección moderada, aunque la disponibilidad de nuevas vacunas candidatas genera optimismo. Además, el uso eficaz de la quimioterapia de primera línea, la terapia combinada con artemisinina (ACT), se ve ahora amenazado por la aparición de resistencia7.

Debido a la falta de una vacuna y a la creciente resistencia a los fármacos actuales, es de suma importancia desarrollar nuevos antipalúdicos y, en particular, diseñar candidatos a fármacos con una estructura y mecanismo de acción diferentes a los de las terapéuticas actuales8. Debido a que los protozoos patógenos carecen de la capacidad de sintetizar purinas a través de la vía de novo, dependen del rescate y reutilización de purinas preformadas para su desarrollo y proliferación. Tienen varias enzimas que no se encuentran en los mamíferos y pueden usarse como dianas terapéuticas9. Los análogos de nucleósidos y nucleótidos se encuentran entre la clase más prometedora de posibles fármacos antipalúdicos porque pueden actuar como inhibidores tanto en la vía de novo para la biosíntesis de nucleótidos de pirimidina como en la vía de rescate de los nucleótidos de purina de Pf10. Se ha informado que los aciclonucleósidos11, así como los 5'-tionucleósidos12, son potentes inhibidores de Pf. Los heterociclos nitrogenados saturados de seis miembros, incluida la morfolina, son elementos estructurales comunes de los compuestos antiplasmodiales13,14.

Recientemente, hemos desarrollado métodos sintéticos para la preparación de nuevos tipos de análogos de nucleósidos modificados con carbohidratos, que se pueden dividir en dos grupos principales. El primer grupo incluye híbridos de morfolino-nucleósido compuestos de unidad(es) de morfolino en el extremo 5' y un nucleósido o 2'-desoxirribonucleósido en el extremo 3'15. El segundo grupo consta de derivados de nucleósidos configurados con 1-lixo, d-xilo o d-arabino configuracionalmente alterados que llevan un sustituyente unido a sulfanilmetilo en diferentes posiciones del anillo de furanosa, que se pueden preparar mediante la adición de radicales fotoiniciados de varios tioles en C4'. , resto exometileno C3' o C2' de nucleósidos16,17,18,19. En cuanto al gran potencial de los análogos de nucleósidos11,12, así como de los derivados que contienen morfolina13,14, en la terapia antipalúdica, decidimos probar la actividad antiplasmodial de los tipos de análogos de nucleósidos recientemente desarrollados. Los transportadores de nucleósidos desempeñan un papel en la absorción de ciertos compuestos antipalúdicos, incluida la cloroquina. Estos transportadores facilitan el transporte de nucleósidos y compuestos similares a nucleósidos a través de la membrana plasmática del parásito. Se ha sugerido que la cloroquina ingresa a los eritrocitos infectados por Plasmodium falciparum a través de transportadores de nucleósidos, que actúan como puntos de entrada del compuesto al parásito. Este mecanismo de absorción permite que la cloroquina llegue a su sitio objetivo y ejerza sus efectos antipalúdicos20.

En los estudios biológicos se incluyeron híbridos de nucleósidos de morfolino previamente preparados (Fig. 1) 15, y también se generó una nueva biblioteca de nucleósidos tiosustituidos (Fig. 2) para investigar la diversidad estructural de los sustituyentes tiol y encontrar los componentes bioactivos del grupo. . En este manuscrito, presentamos estos dos conjuntos de moléculas híbridas basadas en nucleósidos que poseen actividad antiplasmodial basada en su evaluación contra cepas sensibles a la cloroquina (Pf3D7) y resistentes (PfRKL-9). Los cinco análogos principales mostraron concentraciones inhibidoras (CI50) en el rango submicromolar, que se probaron adicionalmente contra la cepa PfRKL-9 resistente a la cloroquina y luego su efectividad in vivo en modelos de ratones.

Híbridos de morfolino-nucleósido15 (el compuesto afectado está resaltado en azul).

l-Lyxo-, d-xilo y d-arabino configuraron análogos de nucleósidos tiosustituidos 7–20 y compuestos de referencia de nucleósidos 21–26 (los compuestos afectados están resaltados en azul).

Los híbridos de morfolino-nucleósido 1–6 involucrados en la evaluación antipalúdica son análogos de oligonucleótidos compuestos por una o dos unidades de morfolino y un ribo-(1, 2, 4–6) o 2'-desoxirribonucleósido natural (3) unidos a través del átomo de nitrógeno de el anillo de morfolina (Fig. 1). Estos derivados híbridos se prepararon a partir de nucleósidos 2',3'-dialdehídos en una reacción doble de aminación-ciclación reductora con 5'-aminonucleósidos15. Los compuestos se sometieron a pruebas antipalúdicas tanto en forma protegida (1–4) como libre (5 y 6). El segundo conjunto de compuestos probados incluye análogos de nucleósidos derivados de adenosina (7–9), uridina (10–17 y 20) y 5-metiluridina (18 y 19) que llevan un sustituyente unido a tioéter en los extremos 5-', 3'. - o posición 2' de la unidad de furanosa (Fig. 2). Una característica específica de los análogos de nucleósidos tio-sustituidos 7-20 es que contienen una unidad de furanosa configuracionalmente modificada en lugar de d-ribosa natural. Utilizando nuestro método de acoplamiento de tiol-eno fotoinducido recientemente establecido21, los análogos de nucleósidos configurados l-lyxo (7–9), d-xilo (10–19) y d-arabino (20) se podrían obtener con alta estereoselectividad mediante adición mediada por radicales. reacciones entre nucleósidos de exometileno C4', C3' o C2' y diversos tioles, incluidos derivados de aminoácidos, 1-tioazúcares o alquilmercaptanos16,17,18,19. Además de los análogos de nucleósidos modificados con furanosa 7–20, en los estudios antipalúdicos se incluyeron como compuestos de referencia algunos derivados de nucleósidos 21–26 simples, protegidos o parcialmente protegidos. La preparación de 10,16 1918 y 21–2615,17 se informó anteriormente; la síntesis de 7–9, 11–18 y 20 se muestra en la Fig. 3 y la Tabla 1.

Síntesis basada en tio-clic de análogos de nucleósidos modificados en 5' y 2'.

Primero, el análogo de nucleósido 7 derivado de adenosina se preparó haciendo reaccionar el derivado de 1-tioglucosa 27a con el derivado de 4'-exometileno adenosina 2817 en condiciones de acoplamiento de tiol-eno previamente optimizadas usando el fotoiniciador 2,2-dimetoxi-2-fenilacetofenona (DPAP). e irradiación con luz UVA (λmax = 365 nm) (Fig. 3). La reacción fotoiniciada tiol-eno comienza con la generación de un radical tiilo a partir del tiol mediante irradiación de luz en presencia del iniciador, luego ocurre mediante un mecanismo de cadena de radicales libres, que incluye un paso de propagación y un paso de transferencia de cadena, para producir un producto de tioéter de tipo anti-Markovnikov con regioselectividad total21,22. Utilizamos varios ciclos de irradiación cortos, añadiendo siempre una nueva dosis de iniciador a la mezcla de reacción, porque se ha demostrado que es más eficaz que la irradiación continua a más largo plazo16,22. En consecuencia, el alqueno 28 y el tiol 27a reaccionaron mediante irradiación UV durante 4 × 15 min en presencia de 4 × 0,1 equiv. de DPAP. La reacción de adición a -80 °C dio el conjugado 7 de tioglucosa-nucleósido como una mezcla 3:1 de los diastereoisómeros l-lyxo y d-ribo. Después de la purificación cromatográfica, se obtuvo una mezcla 6:1 altamente enriquecida en el producto principal de 1-lixofuranosilo (la pureza isomérica de 7 fue del 86%).

Realizamos la eliminación de grupos protectores de 7 para explorar su papel en la actividad antipalúdica. La desacetilación en condiciones de Zemplén produjo 8, mientras que la desprotección simultánea de los grupos isopropilideno y trifenilmetilo con TFA acuoso al 90% en presencia de Et3SiH proporcionó el compuesto 9.

Para producir un análogo de nucleósido modificado en 2' para el ensayo antipalúdico, se preparó el derivado 2'-C-exometileno-3',5'-O-sililen-acetal de uridina (29) y se sometió a una reacción de hidrotiolación fotoinducida con butilo. mercaptano 27b19. La reacción se desarrolló con buen rendimiento y estereoselectividad casi completa proporcionando el d-arabino configurado 2'-C-butilsulfanilmetil nucleósido 20 esperado con un rendimiento del 69% y una pureza isomérica del 91% (relación d-arabino:d-ribo 20:1 de 20). ).

A continuación, preparamos una pequeña biblioteca de análogos de nucleósidos configurados con d-xilo sustituidos en C3' mediante la adición de tioles 27c-27f sobre 3'-C-exometileno-2',5'-di-O-terc-butildimetilsilil-uridina 30 y -ribotimidina 31 (Tabla 1). Los tioles aplicados incluyeron 2-mercaptometilnaftaleno 27c, derivado de 1-cisteína 27d, Mesna 27e y 1-tiohexopiranosas O-acetiladas 27f-27i. Las reacciones se realizaron en varios disolventes seleccionados en función de la solubilidad de los reactivos y se utilizó enfriamiento para lograr una alta diastereoselectividad. Según nuestros resultados anteriores, los acoplamientos tiol-eno se llevaron a cabo a baja temperatura (-40/-80 °C) para lograr una alta conversión y una alta estereoselectividad16,17,18,19,21. Usando tales condiciones, los productos hidrotiolados (11-18) con la configuración d-xilo esperada se obtuvieron de manera eficiente y con excelentes excesos diastereoméricos.

Para empezar, se realizó un ensayo basado en células para evaluar las actividades inhibidoras de los 26 compuestos (1–26) en concentraciones de 1 µM y 10 µM en el cultivo asincrónico de la cepa Pf3D7 sensible a la cloroquina. Se monitorizó el crecimiento de un ciclo intraeritrocítico de Pf después del tratamiento con compuestos, mientras que los parásitos no tratados se consideraron como control. A una concentración de 10 µM, la mayoría de las moléculas inhibieron más del 50% de los parásitos (Fig. S1). Se observó que cinco de los veintiséis compuestos, el híbrido morfolino-nucleósido 1 y los análogos de nucleósidos tiosustituidos 7, 16, 17 y 18 tenían una inhibición significativa del crecimiento de una manera dependiente de la dosis contra Pf3D7. Los híbridos de morfolino-nucleósido 3 y 5 también mostraron una actividad notable contra Pf3D7, pero tienen propiedades citotóxicas (vide infra). Otros compuestos, excepto los siete derivados mencionados anteriormente, mostraron un porcentaje de inhibición del crecimiento insignificante en comparación con el control no tratado contra la cepa 3D7 de Pf.

La concentración de inhibición media máxima (CI50) de las cinco moléculas afectadas (1, 7, 16-18) se midió contra Pf3D7 y la cepa PfRKL-9 resistente a la cloroquina (Fig. 4). En este ensayo, se trataron parásitos trofozoitos tardíos sincronizados con diferentes concentraciones de los compuestos23. El porcentaje de inhibición del crecimiento de los parásitos se evaluó mediante el ensayo SYBR Green. Se encontró que los valores de CI50 de los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 contra Pf3D7 eran 0,92 ± 1,8 µM, 1,78 ± 1,3 µM, 1,33 ± 1,07 µM, 1,15 ± 1,5 µM y 1,31 ± 1,1 µM, respectivamente. A continuación, los cinco compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 se evaluaron contra la cepa resistente PfRKL-9 y mostraron una CI50 de 2,1 ± 1,3 µM, 9,55 ± 1,7 µM, 1,84 ± 1,06 µM, 2,21 ± 1,3 µM y 1,83 ± 0,7 µM. , respectivamente. Los resultados se representan en la Fig. 4 y la Tabla 2. Se encontró que los valores de CI50 de cloroquina contra Pf3D7 y PfRKL-9 eran 25 nM y 125 nM, respectivamente. Aunque los compuestos 3 y 5 mostraron una notable inhibición del crecimiento con valores de IC50 de 1,19 ± 1,1 µM y 1,34 ± 2,1 µM contra Pf3D7; y 4,5 ± 2,5 µM y 6,23 ± 1,5 µM contra PfRKL-9 (Fig. S2), pero mostraron citotoxicidad hacia los glóbulos rojos humanos (Fig. S3). Debido a su naturaleza citotóxica, estos compuestos no se consideraron para experimentos posteriores.

Estimación de la inhibición del crecimiento in vitro y la concentración de inhibición media máxima (CI50) de los compuestos afectados 7, 16, 17, 18 y 1 contra las cepas Pf 3D7 y Pf RKL-9 (A – E). Se utilizó el software Graph Pad Prism 9 para calcular los valores de IC50. Gráfico que muestra el porcentaje de inhibición para el mismo compuesto. El experimento se realizó por triplicado y los datos se expresaron como valores medios ± DE.

La evaluación in vitro de los compuestos 1 a 26 frente a la cepa Pf3D7 sensible a la cloroquina (Fig. S1) permite un análisis preliminar de las relaciones estructura-actividad antipalúdica de los dos nuevos quimiotipos de nucleósidos, híbridos de morfolino-nucleósido (1 a 6) y análogos de nucleósidos tiosustituidos. (7-20).

Cinco de los seis híbridos de morfolino-nucleósido probados mostraron un notable efecto inhibidor de ~ 50% contra la cepa Pf3D7 a una concentración de 1 μM (compuestos 1 a 5, Fig. S1A), lo que demuestra claramente el alto potencial antipalúdico de estas estructuras.

Entre los análogos tiosustituidos con configuración alterada, se encontró que los derivados que contienen tioazúcar tienen una excelente actividad contra Pf (Fig. S1). La configuración del tioazúcar afectó la actividad antipalúdica hasta cierto punto, los compuestos que tenían sustituyentes configurados con gluco y galacto (7, 16-18) mostraron excelentes, mientras que el conjugado de manopiranósido 15 mostró un efecto inhibidor del crecimiento más moderado. Sin embargo, es importante señalar que incluso el nucleósido 15 que contiene manopiranósido mostró un efecto inhibidor más fuerte (~ 50 % de inhibición a una concentración de 1 μM) que los compuestos alquiltio sustituidos 10, 11 y 19 (~ 5–25 % de inhibición a 1 µM). μM), lo que sugiere que los conjugados tiopiranósido-nucleósido pueden tener un potencial antipalúdico significativo. Hemos descubierto que el lugar de sustitución no afectó la actividad antipalúdica; la introducción de un tioazúcar adecuado en la posición 5'- (7) o 3' (16-18) dio como resultado derivados altamente activos.

Nuestro estudio con los compuestos 7 a 9 sugiere que la lipofilicidad apropiada es crucial para la actividad de los análogos de nucleósidos tiosustituidos. Si bien la desacetilación (7 → 8) no afectó significativamente la actividad antipalúdica, la eliminación de los grupos tritilo lipofílicos (7 → 9) resultó en una disminución significativa en el efecto inhibidor del crecimiento (Fig. S1A). Para los compuestos exitosos que contienen 1-tioazúcar, el valor de lipofilicidad es clogP ~ 5 (Tabla 2).

El efecto antipalúdico de los análogos de nucleósidos de purina basados ​​en la inhibición de la vía del metabolismo de las purinas está bien documentado10,11,12, pero apenas hay resultados en la literatura para los agentes antipalúdicos de tipo pirimidina24. En este contexto, cabe destacar que entre los nuevos derivados probados en este estudio, varios análogos de nucleósidos de pirimidina (1, 3 y 4 de los híbridos de morfolino-nucleósido y 12, 15-18 y 20 del quimiotipo de nucleósido de tioazúcar) mostraron buenos resultados. /excelente efecto inhibidor contra Pf.

El efecto de los compuestos sobre los glóbulos rojos humanos se comprobó con la ayuda de espectrofotometría midiendo la lisis de los glóbulos rojos humanos (hRBC). Los compuestos se probaron a concentraciones de 0,5, 1, 5, 10 y 20 μM con una suspensión de glóbulos rojos al 10 % (v/v) durante 1 h y se observó el porcentaje de lisis de glóbulos rojos por los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1.

No se observó lisis significativa de eritrocitos a una concentración de 20 µM (Fig. 5A), mientras que los compuestos 3 y 5 mostraron toxicidad (Fig. S3). Para evaluar los efectos tóxicos de los potentes compuestos en células RAW humanas, se llevó a cabo un ensayo MTT y no se observó ningún efecto de toxicidad aparente para los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 hasta una concentración de 500 µM (Fig. 5B). La Tabla 2 resume los resultados del bioensayo in vitro y los valores de clogP de los compuestos afectados y el compuesto de referencia cloroquina.

(A) Efecto de los compuestos (7, 16, 17, 18 y 1) sobre los glóbulos rojos humanos. El efecto de los compuestos sobre los glóbulos rojos humanos se comprobó a concentraciones de 0,5, 1, 5, 10 y 20 µM. La absorbancia tomada a 415 nm no indicó una lisis significativa cuando se trató con compuestos de hasta 20 µM. (B) Estimación del efecto de citotoxicidad in vitro de análogos seleccionados contra líneas celulares de riñón embrionario (HEK-293) a 100 µM y 500 µM.

El potencial de membrana mitocondrial es un marcador del estado funcional de las mitocondrias. La modificación del potencial de membrana mitocondrial que conduce a una disfunción mitocondrial desencadena la muerte celular25,26. La disfunción mitocondrial se detectó mediante el uso de tinte JC-1 permeable a la membrana. JC-1 es una sonda catiónica, debido al ambiente electronegativo dentro de las mitocondrias funcionalmente activas con Δψm alto, se agrega en mitocondrias energizadas y proporciona fluorescencia de color rojo a 590 nm, pero en caso de Δψm bajo (estado despolarizado), JC-1 permanece en forma monomérica y proporciona fluorescencia de color verde a 530–10 nm. La disminución de la proporción de intensidad de fluorescencia roja/verde de la muestra tratada con el compuesto en comparación con el control no tratado indica una membrana mitocondrial despolarizada27,28. El daño a las mitocondrias del parásito después del tratamiento con los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 se midió según el método descrito anteriormente28. Debido a la naturaleza lipófila del JC-1, es permeable a las células y emite una señal verde (525 nm) en el citoplasma, pero el alto potencial transmembrana de las mitocondrias funcionales hace que se agregue y emita una señal roja (590 nm). Por el contrario, como se muestra en la Fig. 6, el parásito tratado con compuestos mostró una disminución considerable en la tinción roja JC-1 y un aumento en la fluorescencia mitocondrial verde difusa. La pérdida del potencial de membrana mitocondrial se demostró mediante una caída significativa en la proporción rojo/verde de los recuentos teñidos con JC-1 en parásitos tratados con compuestos. Los parásitos tratados con concentraciones IC50 de los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 exhibieron una relación rojo/verde reducida de 5,26 ± 1,13, 4,98 ± 1,77, 6,28 ± 1,55, 5,53 ± 1,40 y 5,69 ± 0,70. El parásito de control no tratado mostró una proporción rojo/verde de 7,04 ± 1,30 (Fig. 6A y B).

(A) Imágenes de fluorescencia de parásitos que muestran JC-1 monomérico (verde) en el citoplasma y agregados de JC-1 (rojo) en las mitocondrias. La primera fila (control) muestra parásitos no tratados con una señal roja brillante a 590 nm que indica una mitocondria funcional. Las filas siguientes muestran los efectos del 7, 16, 17, 18 y 1 con señales de color verde brillante y rojo tenue. (B) La proporción fluorométrica de JC-1 (agregados)/JC-1 (monomérico) en la población de parásitos después del tratamiento con 7, 16, 17, 18 y 1 frente al control sin tratar. Los datos expresados ​​son valores medios ± DE. **P < 0,01 frente a control: prueba de Dunnett. Los experimentos se llevaron a cabo por triplicado.

Se evaluó la actividad antiplasmodial del compuesto más potente, el conjugado 7 de 1-tioglucosa-adenosina con un nivel de pureza de> 95% (Fig. S4) en un modelo de ratón. Se evaluó la eficacia antiplasmodial in vivo de 7 en un modelo de ratones BALB/c infectados con P. berghei ANKA. La dosis compuesta se administró mediante inyecciones intraperitoneales durante siete días seguidos. Para comprobar la parasitemia, se realizaron frotis de sangre fina de ratones infectados con P. berghei ANKA durante un máximo de siete días consecutivos. A una dosis de 50 mg/kg, el compuesto 7 mostró una inhibición del 60% contra P. berghei ANKA, que infecta a los roedores. Se observó que el porcentaje de parasitemia del grupo de ratones tratados con 7 era del 10 % en comparación con el control en el que el porcentaje de parasitemia era del 25 % en el séptimo día (Fig. 7A). El compuesto 7 pudo reducir eficazmente la carga de parásitos en comparación con un grupo de control de ratones no tratados durante siete días consecutivos después de la infección.

Eficacia del compuesto 7 en ratones Balb/c infectados con P. berghei ANKA. Se tomaron como control ratones no tratados. A los ratones infectados se les administró por vía intraperitoneal 7 (50 mg/kg de peso corporal; n = 5) durante siete días consecutivos. (A) El porcentaje de parasitemia se calculó mediante frotis de sangre finos teñidos con Giemsa desde el día 1 al día 7 después de la infección; (B). La supervivencia de los ratones se observó durante 21 días después de la infección mediante el análisis de supervivencia de Kaplan-Meier y las diferencias estadísticas en la supervivencia de los animales se analizaron mediante una prueba de rango logarítmico.

Se observaron grupos de ratones para determinar las tasas de supervivencia medias durante los 21 días posteriores a la infección. Se calculó el tiempo medio de supervivencia (MST), que mostró una mejora en el tiempo medio de supervivencia de los ratones tratados con 50 mg/kg de 7 (MST = 14 días) en comparación con el control (MST = 10 días). Indica que el compuesto 7 mostró una potente actividad antiplasmodial contra P. berghei ANKA in vivo a una dosis de 50 mg/kg y una supervivencia significativamente prolongada de los ratones en comparación con el grupo de control (Fig. 7B). Para hacer inferencias relevantes, se llevaron a cabo análisis estadísticos de los datos in vivo utilizando hojas de datos de Graphpad Prism.

La malaria resistente a los medicamentos se ha convertido en una grave amenaza para el tratamiento de la malaria en todo el mundo, lo que requiere el desarrollo de nuevos antipalúdicos que sean eficaces contra la malaria tanto sensible como resistente a los medicamentos. Las moléculas híbridas que utilizan nuevas entidades con diferentes farmacóforos representan un enfoque racional en el desarrollo de nuevas terapias. El presente trabajo demuestra que los híbridos de nucleósido-1-tioazúcar, como productos sintéticos sin citotoxicidad, podrían ser candidatos adecuados para el desarrollo de agentes antipalúdicos contra Pf. Las concentraciones de CI50 de los análogos de nucleósidos antes mencionados se determinaron en las cepas Pf 3D7 y PfRKL-9 y se encontró que estaban entre 0,95 µM y 2,21 µM. Estos análogos, cuando se aplicaron en concentraciones IC50, provocaron la despolarización del potencial de membrana de los parásitos de la malaria tratados, lo que provocó la muerte celular. Una dosis de 50 mg/kg del compuesto 7 administrada a ratones infectados con el parásito roedor P. berghei ANKA mostró una reducción de hasta el 60 % en la carga parasitaria, junto con una supervivencia prolongada de los ratones.

Además de los conjugados de 1-tioazúcar-nucleósido, nuestro estudio también identificó híbridos de morfolino-nucleósido como un nuevo quimiotipo de candidatos a fármacos antipalúdicos. Desafortunadamente, en los híbridos de morfolino-nucleósido investigados, el fuerte efecto antipalúdico generalmente iba acompañado de una citotoxicidad significativa, por lo que se requiere una mayor optimización de este quimiotipo para desarrollar compuestos antipalúdicos eficaces y seguros.

Derivados de nucleósidos 1–617, 1016 y 1918, naftilmetilmercaptano 27c29, derivado de Fmoc-cisteína 27d17, 1-tioazúcares 27f-i30, adenosina-4'-exometileno 2816, uridina-2'-exometileno 2931, uridina-3'-exometileno 3016 y Se prepararon 5-metiluridina-3'-exometileno 3116 según los procedimientos de la bibliografía. La 2,2-dimetoxi-2-fenilacetofenona (DPAP), el n-butilmercaptano 27b y el MesNa 27e se adquirieron de Sigma-Aldrich Chemical Co. y se utilizaron sin purificación adicional. Las rotaciones ópticas se midieron con un polarímetro automático Perkin-Elmer 241 a 20 °C. Las reacciones se controlaron mediante TLC (Kieselgel 60 F254, Merck) con detección mediante luz UV (254 nm) y inmersión en una solución de molibdato de amonio ácido sulfúrico o ácido sulfúrico etanólico al 5% seguido de calentamiento. Las purificaciones se realizaron en gel de sílice 60 (Merck, 0,040–0,063 mm). Los espectros de RMN 1H (360 y 400 MHz) y RMN 13C (90 y 100 MHz) se registraron con los espectrómetros Bruker DRX-360 y Bruker DRX-400 a 25 °C. Los cambios químicos se refieren a Me4Si (0,00 ppm para 1H) y a las señales del disolvente residual (CDCl3: 77,2, DMSO-d6: 39,5, CD3OD: 49,0 para 13C). Se utilizaron experimentos bidimensionales COZY y 1H − 13C HSQC para ayudar en las asignaciones de RMN16. La proporción diastereomérica de los nuevos compuestos se determinó sobre la base de sus espectros de RMN 1H como se describió anteriormente18,19. Las mediciones de MALDI-TOF MS se llevaron a cabo con un espectrómetro de masas Bruker Autoflex Speed ​​equipado con un analizador de masas de tiempo de vuelo (TOF). En todos los casos se utilizaron 19 kV (voltaje de fuente de iones 1) y 16,65 kV (voltaje de fuente de iones 2). Para el modo reflectrón, se aplicaron 21 kV y 9,55 kV como voltaje del reflector 1 y voltaje del reflector 2, respectivamente. Se aplicó un láser de fase sólida (355 nm, ≥ 100 μJ/pulso) que operaba a 500 Hz para producir la desorción del láser y se sumaron 3000 disparos. Se utilizó ácido 2,5-dihidroxibenzoico (DHB) como matriz y F3CCOONa como agente cationizante en DMF. Las mediciones de ESI-QTOF MS se llevaron a cabo en un instrumento maXis II UHR ESI-QTOF MS (Bruker), en modo de ionización positiva32. Se aplicaron los siguientes parámetros para la fuente de iones de electropulverización: voltaje capilar: 3,5 kV; desplazamiento de la placa final: 500 V; presión del nebulizador: 0,8 bar; temperatura del gas seco: 200 °C y caudal de gas seco: 4,5 L/min. Se aplicó una corrección de fondo constante para cada espectro; el fondo se registró antes de cada muestra inyectando la matriz de muestra en blanco (disolvente). Se inyectó calibrante de formato de Na después de cada muestra, lo que permitió la calibración interna durante la evaluación de los datos. Los espectros de masas se registraron con otofControl versión 4.1 (compilación: 3.5, Bruker) y se procesaron con Compass DataAnalysis versión 4.4 (compilación: 200.55.2969).

Las reacciones fotoiniciadas se llevaron a cabo en un recipiente de borosilicato mediante irradiación con una lámpara de Hg de baja presión (Osram Supratec UV, HTC 150–211, 150 W, 230 V, R7s) dando una emisión máxima a 365 nm, sin ninguna precaución para excluir. aire o humedad16. La configuración experimental consta del recipiente de reacción y el medio de enfriamiento (mezcla de acetona y nitrógeno líquido) en un matraz Dewar y una lámpara UV. Antes de la irradiación, toda la instalación se cubre con una carpa de papel de aluminio para proteger al personal del laboratorio contra la luz ultravioleta16,30. La pureza de los compuestos afectados se evaluó en un sistema HPLC (Gilson, EE. UU.) con una columna analítica (C18) y un detector Thermo Separation Spectra SERIES UV100 acoplado con software. La fase móvil para el análisis se preparó a partir de acetonitrilo y agua (v/v) y los compuestos mostraron una pureza > 95 %.

El estudio se llevó a cabo de acuerdo con las directrices pertinentes. Los experimentos in vivo con ratones se informan de acuerdo con las pautas de ARRIVE (https://arriveguidelines.org).

El alqueno correspondiente, tiol y DPAP (0,1 eqiuv/alqueno) se disolvieron en el disolvente dado para obtener una solución con un rango de concentración de 0,2 a 0,5 M para el alqueno (la solución debe estar lo más concentrada posible). La mezcla de reacción se enfrió a la temperatura dada y se irradió con luz UV durante 15 min. Después de la irradiación otros 0,1 eqiuv. Se añadió DPAP y la irradiación continuó durante otros 15 min. La adición de 0,1 equiv. de DPAP y la irradiación se repitió dos veces más. El disolvente se evaporó al vacío y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna.

El compuesto 28 (200 mg, 0,376 mmol), peracetato de 1-tioglucosa 27a (160 mg, 0,452 mmol, 1,2 equiv.) y DPAP (9,6 mg, 0,0376 mmol, 0,1 equiv.) se disolvieron en tolueno (2 ml) y se hicieron reaccionar. a − 80 °C según el método general. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (elución en gradiente de hexano/acetona 85/15 → 8/2 → 6/4) para dar el compuesto una mezcla inseparable 3:1 de 1-[2',3'-O-isopropiliden-5 '-S-(2,3,4,6-tetra-O-acetil-β-d-glucopiranosil)-5'-tio-α-l-lixofuranosil]-N-tritil-adenina (7) y sus 4' -epímero 2',3'-O-isopropiliden-5'-S-(2,3,4,6-tetra-O-acetil-β-d-glucopiranosil)-5'-tioadenosina (213 mg, 64%, ~ Mezcla 3:1 de isómeros l-lyxo:d-ribo) como un sólido amorfo. Después de una segunda purificación cromatográfica, la pureza diastereomérica de 7 se aumentó a l-lyxo:d-ribo 6:1. Rf = 0,08 (hexano:acetona 8:2), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,98, 7,83 (2xs, 2 × 1H, H-2, H-8), 7,34 (d, J = 7,1 Hz, 8H, aromático), 7,29–7,19 (m, 13H, aromático), 6,98 (s, 1H, NH), 5,98 (s, 1H, H-1'), 5,48 (d, J = 5,9 Hz, 1H) , 5,21 (dd, J = 6,2, 3,1 Hz, 2H), 5,08 (td, J = 9,7, 4,0 Hz, 3H), 4,64–4,56 (m, 2H), 4,21 (m, 1H), 4,14 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,09 (dt, J = 12,4, 3,0 Hz, 2H), 3,65 (ddd, J = 10,0, 4,3, 2,2 Hz, 2H), 3,15 (dd, J = 13,7, 7,6 Hz, 1H) , 2,88 (dd, J = 13,7, 6,1 Hz, 1H), 2,05 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,57 (s, 3H, i-propilideno CH3), 1,41 (s, 3H, i-propilideno CH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 170,5, 170,2, 169,4, 169,3 (4C, 4 × AcCO), 154,2 (1C, Cq adenina), 152,4 (2C, 2 × adenina CH) 148,3, 144,9 (3C, 3 × Cq aromático), 129,0, 127,9, 127,0 (15C, 15 × CH aromático), 121,3 (1C, Cq adenina), 113,4 (1C, i-propilideno Cq), 90,2, 85,0, 84,1, 83,6, 81,3, 76,0, 74,0, 69,9, 68,2 (9C, carbonos esqueléticos), 71,4 (1C, N-TrtCq), 61,9 (1C, C-6''), 28,3 (1C, C-5'), 26,4, 25,1 (2C, 2 × i-propilideno CH3), 20,7, 20,6 (4C, 4 × AcCH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C46H49N5NaO12S+ [M + Na]+ 918,299, encontrado 918,297.

Se disolvió el compuesto 7 (150 mg, 0,166 mmol) en MeOH seco (2,5 ml), luego se ajustó el pH de la solución a aproximadamente 10 y se agitó durante la noche. Al día siguiente, la mezcla de reacción se neutralizó con Amberlite IR-120 (H+), se filtró y se evaporó a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CHCl3/MeOH 95/5 → 9/1) para dar el compuesto 8 (119 mg, 98 %, relación L-lixo D-ribo ~ 3:1) como un sólido blanco. Rf = 0,36 (CH2Cl2/MeOH 9/1). RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,96 (s, 2H, H-2, H-8), 7,32 (d, J = 7,6 Hz, 8H, aromático), 7,16 (dt, J = 22,4, 7,2 Hz, 14H, aromático), 5,99 (s, 1H, H-1'), 5,55 (br. s, 1H, OH), 5,37 (d, J = 5,6 Hz, 1H, H-2'), 5,11–5,08 (m, 1H, H-3'), 4,52 (s, 1H), 4,33 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 3,69–3,54 (m, 3H), 3,53–3,47 (m, 1H), 3,44– 3,34 (m, 1H), 3,23 (s, 2H), 3,20–3,03 (m, 2H), 3,02–2,84 (m, 2H), 1,26 (s, 6H, 2 × i-propilideno CH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 154,1, 148,4 (2C, 2 × adenina Cq), 144,9 (3C, 3 × Cq aromático), 129,1, 128,0, 127,0 (15C, aromático), 120,8 (1C, adenina Cq), 113,4 (1C, i-propilideno Cq), 90,0, 86,6, 85,0, 83,6, 81,1, 79,8, 77,9, 72,7, 69,3 (9C, carbonos esqueléticos), 71,5 (1C, Trt-Cq), 61,4 (1C, C-6''), 29,2 (1C, C-5'), 26,3, 25,0 (2C, 2 × i-propilideno CH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C38H41N5NaO8S [M + Na]+ 750,2574, encontrado 750,2568.

Se disolvió el compuesto 7 (258 mg, 0,288 mmol) en solución acuosa al 90 %. Se añadió solución de TFA (5 ml), luego Et3SiH (149 µl, 0,864 mmol, 3,0 equiv.) y se agitó durante 2 h. la mezcla de reacción se diluyó con tolueno y se evaporó bajo presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (CHCl3/MeOH 97/3 → 95/5 → 9/1) para dar el compuesto 9 (92 mg, 52 %, relación D-ribo:L-lyxo ~ 1:3) como Blanco sólido. Rf = 0,74 (CH2Cl2/MeOH 85/15), EM MALDI-ToF: m/z cálculos para C24H31N5NaO12S [M + Na]+ 636,159, encontrado 636,160.

Se disolvieron el compuesto 30 (200 mg, 0,426 mmol), naftalen-2-ilmetanotiol 27c (148 mg, 0,853 mmol, 2,0 equiv.) y DPAP (10,6 mg, 0,043 mmol, 0,1 equiv.) en THF (1,5 ml) y se irradiaron. durante 4 × 15 min a - 40 ° C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (hexano/acetona 9/1) para dar el compuesto 11 (165 mg, 61 %, con una relación D-xilo:D-ribo ~ 10:1). como un jarabe incoloro. [α]d = + 39,2 (c = 0,12, CHCl3), Rf = 0,20 (hexano/acetona 8/2), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,94 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H-6), 7,87–7,74 (m, 4H, aromático), 7,68 (s, 1H, aromático), 7,50–7,45 (m, 2H, aromático), 5,93 (d, J = 6,7 Hz, 1H, H-1 '), 5,68 (dd, J = 8,1, 2,0 Hz, 1H, H-5), 4,29 (d, J = 7,4 Hz, 1H, H-4'), 4,10–4,05 (m, 1H, H-2' ), 3,97 (dd, J = 11,8, 1,0 Hz, 1H, H-5'a), 3,89 (d, J = 3,0 Hz, 2H, naftilmetileno CH2), 3,85 (dd, J = 11,8, 2,2 Hz, 1H, H-5'b), 2,72–2,59 (m, 3H, H-3' y SCH2), 0,89 (s, 9H, t-Bu), 0,69 (s, 9H, t-Bu), 0,08 (s, 3H , SiCH3), 0,05 (s, 3H, SiCH3), − 0,19 (s, 3H, SiCH3), − 0,22 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 163,4, 150,8 (2C, 2xCO), 140,5 (1C, C-6), 135,0, 133,3, 132,8 (3C, naftaleno C-4a, C-8a y C-7 ), 128,8, 127,7, 127,7, 127,4, 126,7, 126,3, 126,0 (7C, 7 × CH aromático), 102,8 (1C, C-5), 87,6 (1C, C-1'), 79,3 (1C, C-4 '), 77,4 (1C, C-2'), 63,7 (1C, C-5'), 46,2 (1C, C-3'), 36,9 (1C, naftilmetileno CH2), 28,2 (1C, SCH2), 26,0, 25,4 (6C, 2 × SiC(CH3)3), 18,2, 17,6 (2C, 2 × t-BuCq), − 4,8, − 5,5, − 5,7 (4C, 4 × SiCH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C33H50N2NaO5SSi2 [M + Na]+ 665,2877, encontrado 665,2872.

Se disolvieron el compuesto 30 (194 mg, 0,414 mmol), N-Fmoc-cisteína-metil-éter 27d (221 mg, 0,621 mmol, 1,5 equiv.) y DPAP (10,6 mg, 0,041 mmol, 0,1 equiv.) en THF (2 mL) y se irradiaron durante 4 × 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (hexano/acetona 9/1 → 85/15) para dar el compuesto 12 (219 mg, 64 %, ~ 15:1 D-xilo:D- ribo ratio) como un jarabe incoloro. [α]d = + 43,8 (c = 0,42, CHCl3), Rf = 0,19 (hexano/acetona 8/2), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 9,73 (s, 1H, uracilo NH), 7,97 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-6), 7,77 (d, J = 7,5 Hz, 2H, 2xFmoc ArCH), 7,63 (d, J = 7,4 Hz, 2H, 2xFmoc ArCH), 7,41 (t, J = 7,4 Hz, 2H, 2 × Fmoc ArCH), 7,33 (t, J = 7,4 Hz, 2H, 2 × Fmoc ArCH), 5,98 (d, J = 6,6 Hz, 1H, H-1'), 5,80 (d, J = 8,0 Hz, 1H, CysNH), 5,75 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-5), 4,65 (dd, J = 13,1, 5,5 Hz, 1H, H-α), 4,45 (dt, J = 13,2, 6,7 Hz, 1H, Fmoc CH2a), 4,38 (dd, J = 10,5, 7,1 Hz, 1H, Fmoc CH2b), 4,32–4,26 (m, 1H, H-4'), 4,24 (d, J = 7,0 Hz , 1H, fluoreno H-9), 4,15 (dd, J = 9,1, 6,7 Hz, 1H, H-2'), 3,94 (d, J = 11,7 Hz, 1H, H-5'a), 3,87 (dd, J = 11,8, 1,6 Hz, 1H, H-5'b), 3,81 (s, 3H, COOCH3), 3,10 (dd, J = 13,4, 4,9 Hz, 1H, H-βa), 2,99 (dd, J = 13,3 , 5,7 Hz, 1H, H-βb), 2,80 (dd, J = 14,7, 7,7 Hz, 2H, SCH2), 2,68 (dt, J = 15,2, 9,1 Hz, 1H, H-3'), 0,96 (s, 9H, t-Bu), 0,87 (s, 9H, t-Bu), 0,15 (s, 6H, 2xSiCH3), 0,02 (s, 3H, SiCH3), − 0,10 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 171,1 (1C, COOCH3), 163,5 (1C, C-4), 155,7 (1C, Fmoc CO), 150,8 (1C, C-2), 143,7, 141,3 (4C, 4 × Fmoc Cq), 140,5 (1C, C-6), 127,8, 127,1, 125,1, 120,0 (8C, 8 × Fmoc CH aromático), 102,8 (1C, C-5), 87,7 (1C, C-1'), 79,1 ( 1C, C-4'), 77,2 (1C, C-2'), 67,3 (1C, Fmoc CH2), 63,6 (1C, C-5'), 53,6, 52,9 (2C, COOCH3 y C-α), 47,1 , 46,7 (2C, fluoreno C-9 y C-3'), 35,4 (1C, C-β), 30,2 (1C, SCH2), 26,0, 25,5 (6C, 2 × SiC(CH3)3), 18,2, 17,7 (2C, 2 × t-BuCq), − 4,6, − 4,73, − 5,5, − 5,7 (4C, 4xSiCH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C41H59N3NaO9SSi2 [M + Na]+ 848,341, encontrado 848,358.

Se disolvieron el compuesto 30 (200 mg, 0,42 mmol), MesNa 27e (91 mg, 0,56 mmol, 1,3 equiv.) y DPAP (10,6 mg, 0,042 mmol, 0,1 equiv.) en una mezcla de THF (1,7 ml) y MeOH ( 0,3 ml) y se irradiaron durante 4 × 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (CHCl3/MeOH 95/5 → 9/1 → 8/2) para dar el compuesto 13 (253 mg, 80 %, ~ 10:1 D- relación xilo:D-ribo) como un sólido blanco. [α]d = + 45,5 (c = 0,20, CHCl3), Rf = 0,58 (CH2Cl2/MeOH 8/2), RMN 1H (400 MHz, DMSO) δ (ppm) 7,80 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-6), 5,78 (d, J = 6,7 Hz, 1H, H-1'), 5,70 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-5), 4,24 (d, J = 7,6 Hz, 1H, H -4'), 4,09 (t, J = 7,6 Hz, 1H, H-2'), 3,87 (dd, J = 11,8, 1,7 Hz, 1H, H-5'a), 3,82 (dd, J = 11,8, 1,9 Hz, 1H, H-5'b), 2,81–2,73 (m, 2H, SCH2), 2,72–2,61 (m, 5H, H-3', CH2SO3Na, SCH2), 0,91 (s, 9H, t-Bu ), 0,82 (s, 9H, t-Bu), 0,11 (s, 6H, 2 × SiCH3), 0,01 (s, 3H, SiCH3), -0,14 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, DMSO) δ (ppm) 162,8, 150,7 (2C, 2 × CO), 139,7 (1C, C-6), 102,4 (1C, C-5), 86,8 (1C, C-1') , 78,6 (1C, C-4'), 77,0 (1C, C-2'), 63,2 (1C, C-5'), 51,5 (1C, CH2SO3Na), 45,6 (1C, C-3'), 28,4, 27,3 (2C, 2 × SCH2), 25,8, 25,5 (6C, 2xSiC(CH3)3), 17,9, 17,4 (2C, 2 × t-BuCq), − 4,7, − 5,1, − 5,7, − 5,8 (4C, 4xSiCH3 ). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C24H45N2Na2O8SSi2 [M + Na]+ 655,1951, encontrado 655,1946.

Compuesto 30 (100 mg, 0,21 mmol), N-acetil-2-amino-3,4-di-O-acetil-2-desoxi-1-tio-β-D-glucopiranosa 27f (90 mg, 0,25 mmol, 1,2 equiv.) y DPAP (5,3 mg, 0,021 mmol, 0,1 equiv.) se disolvieron en una mezcla de tolueno (1 ml) y MeOH (0,5 ml) y se irradiaron durante 4 × 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (CH2Cl2/acetona 8/2) para dar el compuesto 14 (148 mg, 85 %, ~ 12:1 relación D-xilo:D-ribo) como un sólido blanco. [α]d = + 17,9 (c = 1,09, CHCl3), Rf = 0,25 (hexano/acetona 7/3) RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,92 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H -6), 6,41 (d, J = 9,3 Hz, 1H, NHAc), 5,87 (d, J = 6,7 Hz, 1H, H-1'), 5,66 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H-5) , 5,15 (t, J = 9,7 Hz, 1H, H-3''), 4,94 (t, J = 9,7 Hz, 1H, H-4''), 4,59 (d, J = 10,3 Hz, 1H, H- 1''), 4,29 (d, J = 5,8 Hz, 1H, H-4'), 4,13–3,97 (m, 4H, H-6''ab, H-2' y H-2''), 3,83 (dd, J = 21,4, 11,4 Hz, 2H, H-5'ab), 3,67 (dt, J = 8,5, 4,7 Hz, 1H, H-5''), 2,89 (d, J = 7,4 Hz, 1H, SCH2a), 2,85–2,74 (m, 2H, SCH2b y H-3'), 2,07 (s, 3H, AcCH3), 1,97 (s, 6H, 2 × AcCH3), 1,87 (s, 3H, AcCH3), 0,88 ( s, 9H, t-Bu), 0,79 (s, 9H, t-Bu), 0,07 (s, 6H, 2 × SiCH3), − 0,04 (s, 3H, SiCH3), − 0,17 (s, 3H, SiCH3) . RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 171,1, 170,7, 170,2, 169,3 (4C, 4xAcCO), 163,5, 150,8 (2C, 2 × uracilo CO), 140,6 (1C, C-6), 102,7 (1C, C-5), 87,3 (1C, C-1'), 86,4 (1C, C-1''), 79,1 (1C, C-4'), 77,4 (1C, C-2'), 76,0 (1C, C -5''), 73,6 (1C, C-3''), 68,4 (1C, C-4''), 63,8 (1C, C-5'), 62,6 (1C, C-6''), 53,0 (1C, C -2''), 47,4 (1C, C-3'), 29,0 (1C, SCH2), 25,9, 25,5 (6C, 2 × SiC(CH3)3), 23,1, 20,7, 20,6, 20,5 (4C, 4xAcCH3), 18,1, 17,6 (2C, 2 × t-BuCq), -4,6, -4,8, -5,5, -5,8 (4C, 4xSiCH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C36H61N3NaO13SSi2 [M + Na]+ 854,3361, encontrado 854,3356.

Compuesto 30 (200 mg, 0,42 mmol), 2,3,4-tri-O-acetil-1-tio-β-D-manopiranosa 27 g (186 mg, 0,51 mmol, 1,2 equiv.) y DPAP (10,6 mg, Se disolvieron 0,042 mmol, 0,1 equiv.) en una mezcla de tolueno (1 ml), CH2Cl2 (1 ml) y MeOH (1 ml) y se irradiaron durante 4 x 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (hexano/acetona 8/2 → 7/3) para dar el compuesto 15 (246 mg, 69 %, ~ 50:1 D-xilo:D- relación ribo) como un sólido blanco. [α]D = + 2,73 (c = 0,11, CHCl3), Rf = 0,32 (hexano/acetona 7/3), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 9,83 (s, 1H, NH), 7,89 ( d, J = 8,1 Hz, 1H, H-6), 5,91 (d, J = 7,0 Hz, 1H, H-1'), 5,67 (dd, J = 8,1, 1,6 Hz, 1H, H-5), 5,52 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 5,27 (s, 1H), 5,13 (d, J = 9,9 Hz, 1H, H-4''), 5,05 (dd, J = 10,0, 3,4 Hz, 1H), 4,69 (s, 1H, H-1″), 4,38 (d, J = 7,4 Hz, 1H, H-4'), 4,16–4,11 (m, 2H, H-6″ab), 4,06 (dd, J = 8,9, 7,4 Hz, 1H, H-2'), 3,86 (q, J = 11,6 Hz, 2H, H-5'ab), 3,76–3,67 (m, 1H, H-5''), 3,00 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 2,82 (d, J = 12,1 Hz, 1H, SCH2a), 2,79–2,70 (m, 2H, SCH2b y H-3'), 2,15 (s, 3H, AcCH3), 2,11 (s , 3H, AcCH3), 2,01 (s, 3H, AcCH3), 1,93 (s, 3H, AcCH3), 0,89 (s, 9H, t-Bu), 0,82 (s, 9H, t-Bu), 0,08 (s, 6H, 2xSiCH3), − 0,05 (s, 3H, SiCH3), − 0,17 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 170,8, 170,0, 170,0, 169,6 (4C, 4 × AcCO), 163,3, 150,9 (2C, 2 × uracilo CO), 140,2 (1C, C-6), 103,0 ( 1C, C-5), 87,0 (1C, C-1'), 84,6 (1C, C-1''), 78,7 (1C, C-4'), 77,1 (1C, C-2'), 76,7 ( 1C, C-5''), 71,6, 70,5, 65,5 (1C, C-4''), 63,9 (1C, C-5'), 62,9 (1C, C-6''), 53,5, 47,3 (1C , C-3'), 30,4 (1C, SCH2), 25,9, 25,5 (6C, 2 × SiC(CH3)3), 20,6, 20,6, 20,6, 20,5 (4C, 4 × AcCH3), 18,1, 17,7 (2C, 2 × t-BuCq), − 4,6, − 4,8, − 5,5, − 5,7 (4C, 4xSiCH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C36H60N2NaO14SSi2 [M + Na]+ 855,3201, encontrado 855,3194.

Compuesto 30 (200 mg, 0,42 mmol), 2,3,4-tri-O-acetil-1-tio-β-D-galactopiranosa 27 h (186 mg, 0,51 mmol, 1,2 equiv.) y DPAP (10,6 mg, Se disolvieron 0,042 mmol, 0,1 equiv.) en una mezcla de tolueno (1 ml), CH2Cl2 (1 ml) y MeOH (1 ml) y se irradiaron durante 4 x 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (hexano/acetona 8/2 → 7/3) para dar el compuesto 16 (305 mg, 86 %, ~ 18:1 D-xilo:D- relación ribo) como una espuma blanca. [α]d = + 32,9 (c = 0,17, CHCl3), Rf = 0,32 (hexano/acetona 7/3) RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,89 (d, J = 8,2 Hz, 1H, H -6), 5,89 (d, J = 6,8 Hz, 1H, H-1'), 5,66 (dd, J = 8,1, 1,9 Hz, 1H, H-5), 5,38 (d, J = 3,2 Hz, 1H, H-4''), 5,13 (t, J = 9,9 Hz, 1H, H-2''), 5,02 (dd, J = 10,0, 3,3 Hz, 1H, H-3''), 4,44 (d, J = 9,9 Hz, 1H, H-1''), 4,28 (d, J = 8,0 Hz, 1H, H-4'), 4,15–3,98 (m, 3H, H-2' y H-6''ab) , 3,87 (ddd, J = 29,2, 12,3, 3,9 Hz, 3H, H-5'ab y H-5''), 2,93 (dd, J = 12,4, 4,1 Hz, 1H, SCH2a), 2,82 (t, J = 11,9 Hz, 1H, SCH2b), 2,72 (ddd, J = 21,3, 11,1, 4,5 Hz, 1H, H-3'), 2,08 (s, 3H, AcCH3), 2,05 (s, 3H, AcCH3), 2,01 ( s, 3H, AcCH3), 1,92 (s, 3H, AcCH3), 0,89 (s, 9H, t-Bu), 0,81 (s, 9H, t-Bu), 0,07 (s, 6H, 2xSiCH3), − 0,03 ( s, 3H, SiCH3), − 0,17 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm)170,5, 170,0, 169,9, 169,4 (4C, 4 × AcCO), 163,3, 150,8 (2C, 2 × uracilo CO), 140,3 (1C, C-6), 102,8 ( 1C, C-5), 87,2 (1C, C-1'), 85,3 (1C, C-1''), 78,9 (1C, C-4'), 77,3 (1C, C-2'), 74,8 ( 1C, C-5''), 71,6 (1C, C-3''), 67,4 (1C, C-4''), 66,8 (1C, C-2''), 63,7 (1C, C-5' ), 62,0 (1C, C-6''), 47,1 (1C, C-3'), 28,5 (1C, SCH2), 25,9, 25,5 (6C, 2 × SiC(CH3)3), 20,7, 20,6, 20,5 , 20,5 (4C, 4 × AcCH3), 18,1, 17,6 (2C, 2 × t-BuCq), − 4,6, − 4,8, − 5,5, − 5,8 (4C, 4 × SiCH3). ESI-ToF–MS: m/z calculado para C36H60N2NaO14SSi2 [M + Na]+ 855,3201, encontrado 855,3196.

Compuesto 30 (200 mg, 0,42 mmol), 2,3,4-tri-O-acetil-1-tio-β-D-xilopiranosa 27i (151 mg, 0,51 mmol, 1,2 equiv.) y DPAP (10,6 mg, 0,042 mmol, 0,1 equiv.) se disolvieron en una mezcla de tolueno (1 ml) y CH2Cl2 (1 ml) y se irradiaron durante 4 x 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (hexano/acetona 9/1 → 8/2) para dar el compuesto 17 (286 mg, 93 %, ~ 12:1 D-xilo:D- relación ribo) como un sólido amorfo. [α]D = + 4,4 (c = 0,25 CHCl3), Rf = 0,29 (hexano/acetona 8/2), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,86 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H -6), 5,84 (d, J = 6,2 Hz, 1H, H-1'), 5,64 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-5), 5,13 (t, J = 8,6 Hz, 1H, H- 3'), 4,90–4,80 (m, 2H, H-2'' y H-4''), 4,43 (d, J = 8,8 Hz, 1H, H-1''), 4,23 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-4'), 4,13 (dd, J = 11,5, 5,0 Hz, 1H, H-5''a), 4,05 (dd, J = 8,3, 6,8 Hz, 1H, H-2'), 3,82 (s, 2H, H-5'ab), 3,38–3,28 (m, 1H, H-5''b), 2,82 (s, 1H, SCH2a), 2,81 (s, 1H, SCH2b), 2,63–2,54 (m, 1H, H-3'), 1,97 (s, 9H, 3 × AcCH3), 0,88 (s, 9H, t-Bu), 0,78 (s, 9H, t-Bu), 0,06 (s, 6H, 2 × SiCH3), − 0,04 (s, 3H, SiCH3), − 0,17 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 169,8, 169,6, 169,1 (3C, 3 × AcCO), 163,4, 150,8 (2C, 2 × uracilo CO), 140,2 (1C, C-6), 102,6 (1C, C-5), 87,7 (1C, C-1'), 84,2 (1C, C-1''), 79,1 (1C, C-4'), 77,4 (1C, C-2'), 72,0 (1C, C-3''), 69,4, 68,4 (2C, C-2'' y C-4''), 65,5 (1C, C-5''), 63,3 (1C, C-5'), 47,2 (1C , C-3'), 27,2 (1C, SCH2), 25,8, 25,4 (6C, 2 × SiC(CH3)3), 20,5 (3C, 3xAcCH3), 18,1, 17,5 (2C, 2 × t-BuCq), − 4,8, − 4,9, − 5,7, − 5,8 (4C, 4 × SiCH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C33H56N2NaO12SSi2 [M + Na]+ 783,299, encontrado 783,296.

Compuesto 31 (100 mg, 0,21 mmol), N-acetil-2-amino-3,4-di-O-acetil-2-desoxi-1-tio-β-D-glucopiranosa 27f (90 mg, 0,25 mmol, 1,2 equiv.) y DPAP (5,3 mg, 0,021 mmol, 0,1 equiv.) se disolvieron en una mezcla de tolueno (1 ml) y MeOH (0,5 ml) y se irradiaron durante 3 × 15 min a -80 °C. El disolvente se evaporó a presión reducida y el producto bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en columna (CH2Cl2/acetona 8/2) para dar el compuesto 18 (134 mg, 77 %, ~ 25:1 relación D-xilo:D-ribo) como un sólido blanco. [α]D = + 14,0 (c = 0,10, CHCl3), Rf = 0,28 (CH2Cl2/acetona 9/1), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 7,53 (d, J = 0,9 Hz, 1H, H-6), 5,95 (d, J = 9,3 Hz, 1H, NHAc), 5,89 (d, J = 7,0 Hz, 1H, H-1'), 5,19 (t, J = 9,8 Hz, 1H, H-3 ''), 5,01 (t, J = 9,7 Hz, 1H, H-4''), 4,61 (d, J = 10,4 Hz, 1H, H-1''), 4,33 (d, J = 8,2 Hz, 1H , H-4'), 4,16 (d, J = 2,5 Hz, 1HH-6''a), 4,13 (d, J = 3,8 Hz, 1H, H-6''b), 4,12–4,08 (m, 1H , H-2'), 4,05 (d, J = 9,6 Hz, 1H, H-2''), 3,92 (dd, J = 11,9, 1,1 Hz, 1H, H-5'a), 3,86 (dd, J = 11,8, 1,8 Hz, 1H, H-5'b), 3,71 (ddd, J = 9,8, 5,5, 2,7 Hz, 1H, H-5''), 2,94 (d, J = 1,6 Hz, 1H, SCH2a) , 2,92 (s, 1H, SCH2b), 2,82 (dt, J = 17,7, 9,0 Hz, 1H, H-3'), 2,14 (s, 3H, OAcCH3), 2,04 (s, 6H, 2 × OAcCH3), 1,95 , 1,94 (2 s, 2 × 3H, NHAcCH3 y timina CH3), 0,96 (s, 9H, t-Bu), 0,85 (s, 9H, t-Bu), 0,15 (s, 3H, SiCH3), 0,14 (s , 3H, SiCH3), 0,01 (s, 3H, SiCH3), − 0,13 (s, 3H, SiCH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 171,3, 171,0, 170,2, 169,5 (4C, 4 × AcCO), 163,9, 151,0 (2C, C-2, C-4), 135,7 (1C, C-6) , 111,4 (1C, C-5), 87,2 (1C, C-1'), 86,7 (1C, C-1''), 78,7 (1C, C-4'), 76,8 (1C, C-2') , 76,2 (1C, C-5''), 73,6 (1C, C-3''), 68,4 (1C, C-4''), 63,8 (1C, C5'), 62,7 (1C, C-6' '), 53,3 (1C, C-2''), 47,4 (1C, C-3'), 29,3 (1C, SCH2), 26,2, 25,7 (6C, 2xSiC(CH3)3), 23,3 (1C, NH AcCH3 ), 20,9, 20,8, 20,7 (3C, 3xOAcCH3), 18,4, 17,8 (2C, 2 × t-BuCq), 12,4 (1C, timina CH3), − 4,4, − 4,6, − 5,2, − 5,3 (4C, 4 × SiCH3), EM MALDI-ToF: m/z calculado para C37H63N3NaO13SSi2 [M + Na]+ 868,3518, encontrado 868,3525.

Se disolvieron el compuesto 29 (200 mg, 0,41 mmol), n-BuSH 27b (360 µl, 3,3 mmol, 8,0 equiv.) y DPAP (10,6 mg, 0,041 mmol, 0,1 equiv.) en THF (1 ml) y se irradiaron durante 4 × 15 min a 0 °C. La reacción de la mezcla fue concentrada a baja presión. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna ultrarrápida (hexano/acetona 9/1) para dar el compuesto 2019 (164 mg, 69 % con una relación D-arabino:D-ribo ~ 20:1) como un jarabe incoloro. [α]d = + 16,2 (c = 0,26, CHCl3), Rf = 0,32 (hexano/acetona 8/2), RMN 1H (400 MHz, CDCl3) δ (ppm) 9,77 (s, 1H, NH), 7,62 ( d, J = 8,1 Hz, 1H, H-6), 6,23 (d, J = 4,4 Hz, 1H, H-1'), 5,69 (dd, J = 8,1, 1,6 Hz, 1H, H-5), 4,35 (t, J = 8,8 Hz, 1H, H-3'), 4,11 (dd, J = 13,3, 1,8 Hz, 1H, H-5'a), 4,01 (dd, J = 13,1, 2,7 Hz, 1H, H -5'b), 3,75 (d, J = 8,1 Hz, 1H, H-4'), 2,89–2,81 (m, 2H, H-2' y SCH2a), 2,57–2,50 (m, 1H, SCH2b), 2,41 (td, J = 7,2, 2,0 Hz, 2H, SCH2CH2CH2CH3), 1,47 (dt, J = 14,6, 7,4 Hz, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1,35–1,29 (m, 2H, CH2CH2CH2CH3), 1,06 (dt, J = 11,3 , 4,8 Hz, 28H, 8 × i-PrCH3 y 4 × i-PrCH), 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3H, CH2CH2CH2CH3). RMN 13C (100 MHz, CDCl3) δ (ppm) 163,9, 150,8 (2C, 2xCO), 102,0 (1C, C-5), 84,2 (2C, C-1', C-4'), 60,4 (1C, C -5'), 49,3 (1C, C-2'), 33,2 (1C, SCH2CH2CH2CH3), 31,4 (1C, SCH2CH2CH2CH3), 29,0 (1C, SCH2), 21,9 (1C, CH2CH2CH2CH3), 17,5, 17,4, 17,3, 17,2 , 17,1, 17,1 (8C, 8 × i-PrCH3), 14,1, 13,7, 13,0, 12,8, 12,6 (5C, 4 × i-PrCH y CH2CH2CH2CH3). EM MALDI-ToF: m/z calculado para C26H48KN2O6SSi2 [M + K]+ 611,262, encontrado 611,317.

Pf3D7 y PfRKL-9 se cultivaron siguiendo el procedimiento informado por Trager y Jensen33. En resumen, los medios de cultivo utilizados para el cultivo de parásitos suplementados con RPMI 1640 completo, NaHCO3 al 0,2%, AlbuMax II al 0,5%, hipoxantina 0,1 mM, gentamicina 25 mg/ml a 37 °C en glóbulos rojos O+ humanos y mantenidos en un ambiente de mezcla de gases (5 % O2, 5% CO2 y 90% N2). Para examinar los cambios morfológicos del parásito, se debe preparar una extensión de sangre. Se secó al aire una fina extensión de sangre, se fijó con metanol y se dejó secar antes de teñirla. Los frotis de sangre se tiñeron con una solución de Giemsa al 7,5% (pH de 7,2) durante 15 minutos. Se realizó un análisis de microscopía óptica para evaluar el efecto inhibidor de compuestos en diferentes concentraciones contra Pf3D7 y PfRKL-9.

Se realizó un ensayo de fluorescencia basado en SYBR green I para medir el efecto de inhibición del crecimiento de los 26 compuestos y se realizó un ensayo dependiente de la dosis adicional contra Pf3D7 y PfRKL-9 (cepa de campo india, fuente NIMR, Nueva Delhi, India) en diferentes concentraciones34 . En resumen, los eritrocitos parasitados Pf3D7 y PfRKL-9 (etapa de trofozoíto con 1% de parasitemia) se diluyeron con eritrocitos no infectados a un hematocrito constante del 2% en medio de cultivo. Los eritrocitos parasitados se trataron con diferentes concentraciones de compuestos que oscilaban entre 1 µM y 10 µM, mientras que el DMSO funcionó como control. Se sembraron pocillos por triplicado de eritrocitos parasitados tratados con compuestos en una placa de microtitulación de 96 pocillos después de la incubación a 37 °C durante un ciclo de crecimiento del parásito. La inhibición del crecimiento de parásitos por compuestos se calculó mediante la intensidad de fluorescencia tomada a 485 nm de excitación y 530 nm de espectro de emisión. La inhibición del crecimiento (%) se calculó de la siguiente manera: % de inhibición = [1 − % de parasitemia (tratamiento)/% de parasitemia (control)] *100. Los datos se expresaron como media ± DE.

La citotoxicidad contra la línea celular de riñón embrionario humano (ATCC) se determinó utilizando tinte MTT35. Para medir la citotoxicidad de los compuestos utilizamos tinte MTT para detectar células vivas/muertas. Las células RAW se almacenaron a 37 °C, 5 % de CO2 en matraces de cultivo estériles de 75 cm3 (Corning) en medio de cultivo completo de medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) (a) suplementado con 5 % de suero bovino fetal (FBS), gentamicina (40 mg /ml), cambiando el medio tres veces por semana. Las monocapas se lavaron, se contaron, se diluyeron en medio completo, se distribuyeron en placas de microtitulación de 96 pocillos (5000 células/pocillo), seguido de una incubación durante otras 24 h a 37 °C. Los compuestos de prueba y DMSO se añadieron por triplicado. Después de una incubación de 48 h a 37 °C, se eliminó el sobrenadante y se agregaron a cada pocillo 100 µL de solución de MTT en DMEM completo, seguido de 2 h de incubación a 37 °C. Las placas de cultivo se leyeron en un espectrofotómetro (Tecan Infinity M200, nanoquant, Reino Unido) con un filtro de 490 nm y las concentraciones citotóxicas se determinaron basándose en una curva dosis-respuesta.

Los glóbulos rojos humanos procedían del Rotary Blood Bank, área institucional de Tughlakabad, Nueva Delhi, India. El efecto de los compuestos sobre los glóbulos rojos se comprobó mediante un ensayo hemolítico36. En resumen, la suspensión de glóbulos rojos al 10% (v/v) se lavó con 1 x solución salina tamponada con fosfato (PBS) (pH 7,4) y se resuspendió nuevamente en 1 x PBS. La suspensión de glóbulos rojos se incubó con los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 en diferentes concentraciones (0,5, 1, 5, 10 y 20 μM) durante 1 h a 37 °C. Las muestras se centrifugaron y el sobrenadante se tomó para determinar su absorbancia a 415 nm. Se utilizó Triton X-100 con 1% (v/v) como control positivo. El experimento se realizó por triplicado.

El potencial de membrana mitocondrial de los parásitos de la malaria se determinó utilizando el ensayo MitoProbe™ JC-1 como se describió anteriormente24. En resumen, los parásitos en etapa trofozoíto (10–12% de parasitemia) se trataron con una concentración IC50 de los compuestos 7, 16, 17, 18 y 1 durante 3 h a 37 ° C en la incubadora de CO2. Las muestras se lavaron con 1 x PBS mediante centrifugación a 500 x g durante 2 minutos a temperatura ambiente. Se añadió colorante JC-1 recién preparado a cada muestra con una concentración de trabajo de 5 µg/ml. La incubación se realizó durante 30 min a 37 °C en una incubadora de CO2. Las células se lavaron dos veces con 1x PBS. Se utilizó un espectrofluorómetro para observar el potencial de membrana mitocondrial midiendo las intensidades de fluorescencia del lisado del parásito en la longitud de onda de excitación (520 nm) y emisión (590 nm), respectivamente. Las imágenes de células in vivo se realizaron con la ayuda de la microscopía confocal Olympus fluoview 3000. Se observaron imágenes de células vivas con un objetivo de 100X (inmersión en aceite) y un filtro de paso de banda a 355–460 nm. Los experimentos se repitieron tres veces y sólo se muestran figuras representativas (Fig. 6).

La actividad antiplasmodial del compuesto 7 se investigó en un modelo de ratón con la ayuda del protocolo descrito anteriormente37. Brevemente, se inyectó en ratones una inyección intraperitoneal de 1 × 107 eritrocitos infectados con Plasmodium berghei ANKA diluidos con 1 × PBS estéril. En cada grupo se tomaron cinco ratones. Se hicieron frotis finos con la sangre de la cola de ratones para comprobar la infección. Después de la infección, a ratones infectados con P. berghei se les administró por vía intraperitoneal el compuesto 7 con una dosis de 50 mg/kg de peso corporal, diariamente durante siete días consecutivos después de la infección. Los ratones tratados con 1xPBS se mantuvieron como control del vehículo. Se realizaron frotis de sangre fina desde el día 1 al día 7 para contar la parasitemia y se observaron los ratones durante 21 días para calcular el tiempo medio de supervivencia. Los datos se calcularon y presentaron como porcentaje de aumento de la parasitemia. Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con los procedimientos estándar aprobados36. El estudio fue aprobado por el Comité Institucional de Ética Animal (IAEC) de la Universidad Jawaharlal Nehru, Nueva Delhi, India; y el Comité para el Control y Supervisión de Experimentos con Animales (CPCSEA), Gobierno de la India.

Los datos se analizaron como análisis de varianza unidireccional (ANOVA) para determinar la significancia entre los valores medios obtenidos para el control y después del tratamiento con compuestos. Se utilizó la prueba de Dunnett para comparar el tratamiento y el control y la significación estadística se estableció en P ≤ 0,01.

Los conjuntos de datos utilizados y/o analizados durante el estudio actual están disponibles del autor correspondiente (AB) previa solicitud razonable.

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Esta investigación fue financiada por la Oficina Nacional de Investigación, Desarrollo e Innovación de Hungría (K 132870 a AB). La SS reconoce el Programa de Investigación en Medicamentos y Productos Farmacéuticos (DPRP) (Proyecto N° P/569/2016-1/TDT) y DST-SERB (Proyecto N° CRG/2019/002231). VS recibió el premio SERB-NPDF (PDF/2017/001525) del Departamento de Ciencia y Tecnología (DST) del Gobierno de la India, Nueva Delhi. NS reconoce al Consejo de Investigaciones Científicas e Industriales (CSIR) por su beca de investigación senior. Agradecemos al Centro de Investigación de Instrumentación Avanzada (AIRF) de la Universidad Jawaharlal Nehru por la obtención de imágenes de células vivas. Reconocemos al Instituto Nacional de Investigación de la Malaria por proporcionar la línea resistente a la cloroquina PfRKL-9.

Financiamiento de acceso abierto proporcionado por la Universidad de Debrecen.

Estos autores contribuyeron igualmente: Miklós Bege, Vigyasa Singh y Neha Sharma.

Departamento de Química Farmacéutica, Universidad de Debrecen, Egyetem Tér 1, Debrecen, 4032, Hungría

Miklós Bege, Nóra Debreczeni, Ilona Bereczki, Pál Herczegh y Anikó Borbás

Instituto de la Industria de la Salud, Universidad de Debrecen, Nagyerdei Körút 98, Debrecen, 4032, Hungría

Miklós Bege

Grupo de Investigación de Interacción y Reconocimiento Molecular MTA-DE, Universidad de Debrecen, Egyetem Tér 1, Debrecen, 4032, Hungría

Miklós Bege

Centro Especial de Medicina Molecular, Universidad Jawaharlal Nehru, Nueva Delhi, 110067, India

Vigyasa Singh y Shailja Singh

Departamento de Farmacología y Toxicología, Facultad de Farmacia, Universidad de Arizona, Tucson, AZ, 85721, EE. UU.

Vigyasa Singh

Laboratorio de Química Traslacional y Descubrimiento de Fármacos, Departamento de Química, Hansraj College, Universidad de Delhi, Delhi, India

Neha Sharma y Brijesh Rathi

Laboratorio Nacional de Virología, Universidad de Pécs, Ifjúság Útja 20, Pécs, 7624, Hungría

Ilona Bereczki y Anikó Borbás

Departamento de Química, Casa Miranda, Universidad de Delhi, Delhi, 110007, India

Poonam

Escuela de Salud Pública de Delhi, Institution of Eminence (IoE), Universidad de Delhi, Delhi, 110007, India

Poonam y Brijesh Rathi

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AB, SS, PH y BR desarrollaron los conceptos y diseñaron los experimentos. MB, VS, NS, ND, IB y P. realizaron los experimentos y analizaron los datos bajo la supervisión de AB, PH, SS y BRMB, VS, P., SS, BR y AB, escribieron el borrador inicial del manuscrito. AB y BR revisaron y editaron el manuscrito. AB, SS y BR fueron responsables de la adquisición de financiación. Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.

Correspondencia a Brijesh Rathi, Shailja Singh o Anikó Borbás.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Reimpresiones y permisos

Bege, M., Singh, V., Sharma, N. et al. Evaluación antiplasmodial in vitro e in vivo de análogos de nucleósidos modificados con azúcar. Informe científico 13, 12228 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-39541-4

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Recibido: 13 de abril de 2023

Aceptado: 26 de julio de 2023

Publicado: 28 de julio de 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-39541-4

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